EBV – påvisning av nukleinsyra (kvantitativ PCR)

Praktisk information

Allmänt

Misstanke om infektion orsakad av Epstein-Barr virus (EBV). Detta virus är vanligt förekommande hos immunsupprimerade patienter såsom transplantations- och AIDS-patienter där det kan ge svåra infektioner. Polymerase chain reaction (PCR)-analys kan utföras på många typer av kliniska provmaterial. Med realtids PCR är det möjligt att både detektera och kvantifiera antalet virusgenom i provmaterial. Kvantifiering kan utnyttjas för att följa utvecklingen av antalet genom vid behandling och för bedömning av virusinfektionens svårighetsgrad.

Indikation

Indikation för EBV-PCR är i första hand misstanke om lymfoproliferativ sjukdom eller lymfom hos immunsupprimerade patienter. Hjärnlymfom hos AIDS-patienter och lymfom efter transplantation är nästan alltid associerade till EBV.
Primärinfektion med EBV kan orsaka mononukleos (körtelfeber) hos immunkompetenta personer, och virus återfinns vid denna sjukdom med PCR i 100% av undersökta saliver och separerade vita blodkroppar, men endast i ca 50% av serumprover. Saliv och blodkroppar är positiva hos 20-50% av friska virusbärare.

Serumundersökning har således låg sensitivitet, medan saliv och blodkropps-undersökning har låg specificitet för mononukleos. I enstaka fall ger EBV neurologiska komplikationer hos tidigare friska. EBV i likvor kan med PCR-teknik ibland påvisas hos sådana patienter, men varken sensitiviteten eller specificiteten är fullständigt kartlagda. Serologiska undersökningar är att föredra vid misstanke om primär EBV-infektion. Enstaka immunsupprimerade patienter producerar dock inte antikroppar vid pågående primär EBV-infektion. PCR-undersökning av saliv, serum eller blodkroppar kan i dessa fall påvisa infektion trots negativ serologisk undersökning.

Kontakt

Provsvar: 08-457 25 75, 08-457 26 46, 08-457 26 23, 08-457 26 21
Övriga frågor: 08-457 26 21

Provhantering

Undvik om möjligt att skicka prov på fredagar eller dag före långhelg.

  • Benmärg med tillsats av EDTA: Minsta volym 200 µL. Prov ska förvaras i rumstemperatur före och under transport.
  • Benmärg med tillsats av heparin: Bör undvikas, heparin kan inhibera i analysen.
  • Biopsi: Förvaras i ett rör med steril 0,9 % NaCl i en volym som precis täcker provet. Prov bör förvaras i kyl i max ett dygn före transport annars bör det frysas och förbli fruset under transporten. Ofrusna kan transporteras i rumstemperatur.
  • Blod (helblod med tillsats av EDTA): Minsta volym 200 µL. Prov ska förvaras i rumstemperatur före och under transport.
  • Blod med tillsats av heparin: Bör undvikas, heparin kan inhibera i analysen.
  • Bronkoalveolärt lavage (BAL): Minsta volym 50 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före transport. Prov kan förvaras i rumstemperatur under transporten.
  • Cerebrospinalvätska (CSF): Minsta volym 50 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före transport. Prov kan förvaras i rumstemperatur under transporten.
  • EDTA-blod (helblod med tillsats av EDTA ): Minsta volym 200 µL. Prov ska förvaras i rumstemperatur före och under transport.
  • Munsköljvätska: Minsta volym 50 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före transport. Prov kan förvaras i rumstemperatur under transporten.
  • Obduktionsmaterial: Förvaras i ett sterilt kärl. Prov bör förvaras i kyl i max ett dygn före transport annars bör det frysas och förbli fruset under transporten. Ofrusna material kan transporteras i rumstemperatur.
  • Plasma: Minsta volym 200 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före och under transport.
  • Saliv: Minsta volym 50 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före och under transport.
  • Serum: Minsta volym 200 µL. Förvaras i rumstemperatur, kyl eller frys före och under transport.

Transport

För praktisk handledning inför transport av prov inom Sverige hänvisar vi till publikationen Packa provet rätt.

Beställning av remiss:

Beställ/ladda ner SMI:s remiss

Priser:

För aktuella priser hänvisar vi till publikationen Prislista för speciell diagnostik

Information om analysen

Metod

Med PCR-teknik amplifieras specifika nukleinsyrafragment (DNA-fragment). Specifika primrar amplifierar ett fragment vid närvaro av templat och en specifik fluorescerande probe påvisar de amplifierade fragmenten. Mängden ursprungligt templat i okända prov kvantifieras genom att signalen från dessa jämförs med en standardkurva generad från prov med en känd mängd templat. DNA-polymeraset kan dock inhiberas av olika faktorer, exempelvis hemoglobin och proteinkomplex som kan finnas i de kliniska provmaterialen. En inhibitionskontroll analyseras därför för alla prover för att påvisa inhibition.

Svar

<200 genom/mL: negativt
x genom/mL: positivt
Provmaterialet kan ej bedömas då det innehåller faktorer som inhiberar PCR-reaktionen.

Bedömning

Alla prover analyseras i duplikat. Till en tredje brunn tillsätts prov samt en liten mängd DNA. Denna brunn är provets inhibitionskontroll.
För att ett prov skall bedömas som positivt skall duplikatanalyserna av provet vara positiva samt inhibitionskontrollen gå fram till mer än 20 %.
Om endast en brunn av ett prov i duplikat blir positiv analyseras provet om.

Tipsa en vän

Uppdaterad 2011-06-21 14:50

Kontakt
Avdelningen för diagnostik och vaccin